化妝品體內哺乳動物細胞微核試驗目的與流程科普

88次 2025.10.24

　　化妝品體內哺乳動物細胞微核試驗是一種體內遺傳毒性測試方法，通過觀察實驗動物（常用小鼠、大鼠）骨髓或外周血中紅細胞的微核，來評估化妝品原料或終產品經體內接觸后，是否具有誘發(fā)染色體損傷或紡錘體損傷的潛在遺傳毒性風險。


化妝品體內哺乳動物細胞微核試驗


　　化妝品體內哺乳動物細胞微核試驗目的


　　1、識別染色體損傷效應


　　微核的形成主要與兩種染色體損傷相關：一是受試物導致染色體發(fā)生斷裂，產生的片段因無法隨細胞分裂進入子細胞核，而形成獨立的微核；二是受試物干擾細胞紡錘體功能，導致染色體不能正常分離，使整個染色體或染色單體滯留在細胞質中，形成微核。通過計數微核率，可直接判斷受試物是否具有這類遺傳毒性。


　　2、評估體內代謝后的真實風險


　　受試物經口服、皮膚涂抹等方式進入動物體內后，會經過肝臟等器官的代謝轉化。試驗能評估受試物及其代謝產物共同作用下的遺傳毒性，避免因體外試驗無法模擬體內代謝過程，而遺漏某些經代謝后才產生的致突變風險，結果更具生物學意義。


　　3、為化妝品安全評估提供體內數據支撐


　　作為體內遺傳毒性試驗，其結果與體外試驗（如體外細胞基因突變試驗）相互補充，形成“體外+體內”的完整評估鏈條，為化妝品原料的安全性審核和產品合規(guī)上市提供關鍵的體內毒理學數據。


　　化妝品體內哺乳動物細胞微核試驗流程


　　1）試驗準備與動物選擇


　　動物模型：首選嚙齒類動物，常用健康的ICR或昆明種小鼠，體重一般為25-35g，雌雄各半。


　　動物分組：至少設置3個劑量組、1個陰性對照組（給予溶媒，如生理鹽水）和1個陽性對照組（給予已知致突變劑，如環(huán)磷酰胺），每組至少5只動物。


　　2）受試物給予與處理


　　給予途徑：通常采用經口灌胃方式，也可根據化妝品實際使用場景（如皮膚接觸）考慮經皮涂抹等途徑。


　　給予劑量與周期：根據預試驗結果設定劑量，高劑量需引起輕微毒性但不導致大量動物死亡，低劑量接近無毒性水平，組間距一般為2-4倍。通常連續(xù)給予受試物2-3天，末次給藥后18-24小時處死動物。


　　3）樣本采集與制備


　　骨髓采集：處死動物后，剝離股骨，用生理鹽水沖洗骨髓腔，收集骨髓細胞懸液。


　　涂片與固定：將細胞懸液均勻涂抹在載玻片上，自然干燥后，用甲醇固定10-15分鐘，待玻片干燥。


　　染色：常用吉姆薩染液或瑞氏-吉姆薩混合染液染色，染色后水洗、干燥，制成可供顯微鏡觀察的標本。


　　4）鏡檢觀察與結果判定


　　細胞選擇：在光學顯微鏡下，選擇分散良好、染色清晰的骨髓嗜多染紅細胞（PCE）進行觀察。這類細胞處于未成熟階段，對染色體損傷更敏感，是微核檢測的理想細胞。


　　微核計數：每只動物至少觀察1000個嗜多染紅細胞，記錄含有微核的細胞數量，計算微核率（千分率，‰）。同時，計數200個紅細胞，計算嗜多染紅細胞與成熟紅細胞（NCE）的比例，評估受試物對細胞成熟的影響。


　　結果判定：若高劑量組微核率顯著高于陰性對照組，且存在劑量-反應關系，或某一劑量組微核率顯著高于陰性對照組并超過歷史陰性對照范圍，則判定受試物在本試驗條件下具有致突變性。