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博凌科為的SYBR Green I與dsDNA 結(jié)合熒光信號(hào)可增強(qiáng)800～1000倍。在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR Green I熒光染料，它特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，熒光信號(hào)增強(qiáng)，而不摻入鏈中的SYBR Green I染料分子熒光不變，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。熒光可以在退火階段或者延伸階段測(cè)定。

注意事項(xiàng)：

1．使用濃度對(duì)熒光PCR結(jié)果的影響

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SYBR Green I的使用濃度是保證熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)成功非常關(guān)鍵的因素。如果SYBR Green I的濃度過(guò)低會(huì)使熒光信號(hào)的變化降低，這就意味著低拷貝的樣品可能無(wú)法檢出。而在高濃度時(shí)，將會(huì)抑制PCR反應(yīng)，降低PCR反應(yīng)效率。所以一般在使用SYBR Green I時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化使用濃度，反應(yīng)的終濃度為0.2×到1×之間。

2．鎂離子濃度的影響

和為工向權(quán)積節(jié)觀劃，存按卻。

提高鎂離子濃度可以降低SYBR Green I對(duì)PCR反應(yīng)的抑制作用。我們建議在用SYBR Green I進(jìn)行熒光PCR反應(yīng)時(shí)，鎂離子濃度比無(wú)SYBR Green I 的普通 PCR 反應(yīng)高出0.5～3mM。

的地年第角回壓，且千王。

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